Векторы на базе аденоассоциированного вируса признаны сравнительно безопасными, так как он не является патогенным и не способен реплицироваться в отсутствии ко-инфекции носителя вспомогательным вирусом, так как не кодирует собственных ферментов репликации. Для работы с не несущими потенциально онкогенный материал аденоассоциированными вирусами достаточно соблюдать правила работы BSL-1.
Рекомбинантные AAV (rAAV) не имеют в своём составе вирусную ДНК и представляют из себя, по сути, белковую структуру, которая может проникать через клеточную мембрану и доставлять ДНК в ядро. В отсутствии Rep-белков, трансгены, имеющие ITR-последовательности с обеих сторон молекулы, не способны встраиваться в геном клетки-хозяина, но способны образовывать кольцевые конкатемеры. В такой форме они способны эписомально существовать в клеточном ядре и экспрессироваться длительное время в неделящихся клетках. Классическая схема генома rAAV вектора включает в себя промотор млекопитающих, ген интереса и polyA, окружённые с обеих концов вирусными ITR
К данному моменту идентифицировано 12 серотипов AAV. Структура капсидов всех серотипов близка по строению, но эпитопный состав у них различен, что и определяет тканеспецифичность. Для более эффективной трасдукции были разработаны так же мозаичные или химерные серотипы, которые состоят из участков других серотипов, либо имеют изменения в аминокислотном составе капсида.
Для заказа доступны следующие серотипы AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV DJ, AAV9-PHP.B, AAV9-PHP.eB, AAV9-PHP.S, AAVshh10, AAVrh10.
AAV crude in vitro
Объем наработки - 300 µl ≥10^10 gc/ml
Осветленный лизат в буфере PBS+0.001 % Pluronic+150 mM NaCl. Подходит для проверки работоспособности и эффективности вирусных конструктов в формате 6-96 луночных планшетов.
AAV in vitro очищенный
Объем наработки - 200 µl ≥10^11 gc/ml
Очищенные с помощью ультрацентрифугирования в градиенте йодиксанола вирусные частицы в буфере PBS+0.001 % Pluronic.
Подходит для проведения in-vitro экспериментов в формате 96-6 луночного планшета, 35 мм чашках Петри или флаконах.
AAV small scale in vivo
Объем наработки - 200 µl ≥10^12 gc/ml
Очищенные с помощью ультрацентрифугирования в градиенте йодиксанола вирусные частицы в буфере PBS+0.001 % Pluronic.
Подходит для проведения in-vivo экспериментов на небольших группах животных или больших in-vitro экспериментов.
AAV regular scale in vivo
Объем наработки - 1000 µl ≥10^12 gc/ml
Очищенные с помощью ультрацентрифугирования в градиенте йодиксанола вирусные частицы в буфере PBS+0.001 % Pluronic.
Подходит для проведения in vivo экспериментов на небольших группах животных.
AAV crude in vitro
Срок наработки - 1-3 недели
Требуемый объем плазмиды с GOI от заказчика - ≥ 20 мкг
Срок наработки - 2-3 недели
Требуемый объем плазмиды с GOI от заказчика - ≥ 60 мкг
Срок наработки - 2-4 недели
Требуемый объем плазмиды с GOI от заказчика - ≥ 250 мкг
Срок наработки - 3-5 недель
Требуемый объем плазмиды с GOI от заказчика - ≥ 250 мкг
В цену и срок наработки не входит стоимость и время наработки плазмид, в случае если Заказчик не может передать требуемое количество. Стоимость и срок наработки плазмиды обсуждаются в таком случае отдельно. Концентрация передаваемых плазмид не ниже 0,2 mg/ml, чистота А260/280 не ниже 1,80. При передаче плазмид для наработки требуется информация о полной длине плазмиды.
Количество частиц и сроки наработки действительны только для вирусных конструктов размером не больше 4.7 kb включая ITR (без учета бактериального кора). Наработка конструктов размером больше 4,7 kb или формата self-complemented AAV обсуждается отдельно.
Титр ДНК-содержащих вирусных частиц определяется методикой qPCR на участки ITR.
Для оформления заказов и консультаций по вопросов наработки вирусных частиц обращайтесь на почту moshchenko.aa@gmail.com
